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精液处理方法对辽宁绒山羊冻精质量的影响

发布时间:2013-04-12 10:38 新闻来源:未知 作者:admin
精液的处理包括精液的稀释方法和所用稀释液的种类、降温平衡、储存、解冻、环境温度的控制等内容。
        1 精液稀释方法及稀释液种类对冻精质量的影响
        1.1 稀释方法的影响
        不同的稀释方法不仅会对原精质量产生明显的影响, 还会对冻精质量发生作用。稀释按次数可分为1 次稀释、2 次稀释和3 次或多次稀释等。在精液采集后先用不含甘油的稀释液进行第1次稀释, 在冷冻前再用含甘油的稀释液进行第2 次稀释, 采用两次稀释的效果要好于一次稀释。吴云海等对种公牛精液的研究表明, 采用1 次稀释方法稀释精液,同样也能达到比较理想的冷冻效果, 关键在于稀释液配方。不同的稀释比例, 意味着精液与稀释液相混后各种药品的浓度也是不同的, 对精液的冻后效果是不同的, 绒山羊精液采用1: 3~5 倍稀释, 冻后的活力等指标明显好于其它倍数稀释的质量, 而用密度仪计算的稀释液的稀释值对精液进行稀释时, 则无法将稀释液的具体浓度考虑进去, 以至于总体的冻后质量不及按固定的比例进行稀释的效果好。
        1.2 稀释液种类对冻精质量的影响
        1.2.1 根据营养物质的不同, 稀释液主要分为糖类和奶类多糖的主要作用在于造成精子细胞适当的脱水,以降低精液的结冰点温度, 从而避免精细胞在快速降温过程中在精细胞内形成冰晶。奶液是等渗液体, 内含多种有利于维持精子活力的成分, 奶液用于精液冷冻时, 还要添加阿拉伯糖、果糖等糖类。
        1.2.2 稀释液中的缓冲成分
        稀释液中缓冲成分包括磷酸盐、乙酸盐、有机兼性离子分子如TES( N- 三羟甲基- 甲基- 2- 氨基乙烷磺酸) 、Tris ( 三羟甲基氨基甲烷) 。主要是缓冲精子在保存过程中, 由于代谢而使精液的pH升高所带来的不利影响。此外多数缓冲物质还可以缓和稀释液中离子对精子的有害作用。
        1.2.3 低温保护剂
        低温保护剂多是多羟基化合物, 其羟基能与水形成氢键, 有很强的亲水性, 阻止细胞内冰晶形成, 使水处于过冷状态, 降低危险区上限,缩小危险温度区的范围。各种防护剂虽能在冷冻过程中起到保护精子的作用, 但又有毒害作用, 这也是影响冷冻效果的一个原因。主要的防护剂有甘油、二甲基乙酰胺( DMA) 、二甲基甲酰胺( DMF) 、二甲基亚砜( DMSO) 、乙二醇( EG) 、甲基乙酰胺( MA) 、甲酰胺。
        2 降温平衡和冷冻温度对冻精质量的影响
        2.1 降温平衡
        精液稀释后应立即置于降温的环境中, 从精液离开种羊机体时的35~36 ℃下降至0~5 ℃时大至需要40 min~3 h。其中, 从35~36 ℃下降至15 ℃以20~40 min 为宜。精液在15 ℃以上的温度环境中停留时间越长, 对冻后的细管冻精质量越是不利; 实验证明, 精液在15 ℃的环境中停留的时间越长,经过冷冻处理再解冻后的存活时间越短, 二者呈强的正相关。但是降温过快, 对精子的影响也是不利的。降温过程和平衡过程既可分开进行如先降温后平衡, 也可同时进行即边降温边平衡。前者适用于含丙三醇等毒性较高的防冻剂成分, 后者主要用于不含毒性或毒性较低的稀释液,
        大多进行一次稀释。精液在5~15 ℃停留30 min 与停留80 min 的冻后活力和存活时间差别不明显。江龙海等研究表明, 精子在4~5 ℃下平衡时间对精子活率有影响, 平衡1 h 解冻活力最高, 随平衡时间的逐渐延长, 解冻活率有逐渐下降的趋势, 但15、30 min 也较低。
        2.2 精液冷冻
        辽宁绒山羊精液降温平衡后冷冻速度过快, 会使精子内部的水分子无法及时脱离至精子外部, 因形成冰晶导致细胞膜破裂而造成精子死亡。同样, 降温速度过慢也会在精子内部形成冰晶而造成精子死亡。辽宁绒山羊的精液初冻温度以- 100 ℃±5 ℃效果最好。
        2.3 温区转换
        是指由对精液的平衡温度区间转换到精液冷冻时的温度区间的过程和方式。由于制作冻精时的车间环境温度一般较高( 10~30 ℃) , 当将平衡后的精液转移到初冻环境温度时, 细管冻精的温度都会出现回升, 可在2~3 s 回升至8~12 ℃, 此温度的细管冻精再进行冷冻, 其冻后活力可降低非常明显甚至于无法冷冻成功。因此, 必须保持精液在温区转换时细管内冻精温度不回升或回升程度非常小,在冷冻要求的技术参数范围内。
        3 冻精解冻
        冷冻精液的解冻过程, 同冷冻过程一样, 必须迅速通过精子冷冻的危险温区, 才不至于对精子造成损伤。近年来绵羊细管冷冻精液的解冻温度和时间变化很大, 如Maxwell 直接把细管投入37 ℃的水中60 s;IngridOlesenz 直接把0.25 mL 微细管放于70 ℃水浴中解冻8 s; GrahemJ.K.的解冻方法是39 ℃的水浴中解冻30 s; Pontbriand 等人认为, 35~40 ℃或50~70 ℃解冻对精子存活率或顶体完整性和产羔率无影响。目前, 辽宁绒山羊的细管冻精的解冻解冻方法以38~40 ℃的温水将精液溶化至刚呈透明状为主; 其技术要点是既使精液能够较快地越过冰晶形成的危险温区, 又能够做到精液解冻后自身温度并不高, 能够很快适应配种环境的温度, 防止精液的温度波动对精子造成的不利影响, 同时又便于更多的人进行操作和掌握。
        4 其它因素
        4.1 辐射
        冻精保存在液氮罐中, 来自阳光的辐射大大减弱了, 但是还是存在一些能穿透液氮生物容器的其它射线, 从而对冻精质量产生不良影响, 主要表现在精子中染色体的畸变及冻精解冻后的活力和顶体完整率的下降。
        4.2 输精工具
        在冻配过程中, 输精枪枪头的过热和过冷均会造成细管冻精温度的很大波动, 从而降低了冻精解冻后的活力和存活时间等技术指标。
        4.3 光线、烟雾、灰尘、消毒药品及不良气味对冻精的影响
        强烈的光线会直接对精子造成伤害, 弥漫在空气中的香烟雾气和灰尘对精子具有很大的毒害作用,所有的消毒药品即使浓度很低, 也会在非常短的时间内甚至瞬间杀死精子。           
 

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