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羊的人工受精技术

发布时间:2013-05-14 10:35 新闻来源:未知 作者:admin
     人工授精的优越性早已在多种动物的繁育和品种改良的历史中得到证明,除了能缩短群体配种的时间,便于实施选配方案,防止疾病传播等优点外,更重要的是能加快品种改良速度和提高种质资源的利用率。是目前条件下,能够突破区域限制,实施大规模山羊杂交改良计划的最有效手段。
    (一)器械,药物的准备干燥箱、高压蒸气消毒锅、生物显微镜(100~400倍)、保温箱(自制)、电冰箱、液氮罐(30升)、酒精灯、假阴道、内窥镜或开膣器、集精杯、75%酒精棉球、生理盐水棉球、温度计、药用凡士林、镊子、载玻片、盖玻片、;输精枪、l毫升注射器、脸盆、毛巾、白瓷盘、碱面、新洁尔灭、纯净水。
    (二)所用器械的清刷消毒所有器械先用温碱水冲洗,再用清水反复冲洗最后用纯净水冲洗。将输精枪(管)、一次性注射器、开膣器、镊子、药用凡士林、集精杯进行高压消毒,并用干燥箱进行烘干,温度计、内胎用75%酒精消毒。输精管最好每羊1只,如确实不够用,可先用生理盐水棉球擦净外壁,再用酒精棉球擦洗,等酒精挥发后,再用生理盐水冲洗3~5次方可使用。内窥镜可用酒精或酒精灯消毒。
    (三)采精及检精技术
    1、假阴道的安装。(1)清洗:假阴道各部件在使用前须用去污剂、肥皂或碱水彻底清洗,然后用净水冲洗。清洗内胎时,应注意检查有无破损、裂缝和小孔,以防漏水漏气。集精杯用净水冲洗后,需再用蒸馏水冲洗。(2)安装:将内胎放入外壳内,然后将内胎的两端外翻;外面套以胶圈牢牢固定,内胎应平直而无扭曲,松紧适度,集精杯直接装在假阴道末端。(3)消毒:内胎可用75%的酒精棉球擦洗消毒。玻璃器皿和润滑剂等可在高温干燥箱中(150—180℃)烘烤半小时。用酒精消毒的物品,必须在酒精完全挥发后才能使用,使用前再用灭菌生理盐水冲洗,将可能残留的酒精清除后再使用,以防酒精杀伤精子。蒸气消毒的器皿,也要用生理盐水冲洗后方能使用。采精前在内胎入口端至2/3处,均匀涂以润滑剂(消毒的凡士林)。采精时内胎表面的温度严格保持在38~40℃。
    2、采精操作。(1)台羊准备:选择大小适当的发情母羊作台羊,公母羊要刷拭干净,尾根部用0.2%新洁尔灭擦洗消毒。(2)采精操作:保定好台羊,将公羊牵至台羊处,采精人员蹲在台羊右后方,右手握假阴道(气门朝下)贴靠在母羊尾根部,入口稍朝下,与地面呈35—40度角,当爬跨台羊时,左手轻握其包皮将阴茎导入假阴道,(不要用手触及阴茎,也不能用假阴道去套阴茎),并使假阴道与阴茎保持成一直线,当公羊向前一冲射精后立即把有集精杯端略放低,并贴紧包皮随公羊跳下后退出,并迅速将集精杯口向上,放出气体,取下集精杯,迅速送检精室,并注意保持集精杯温度。
    3、精液的检查。采集的精液必须经过检查和进一步处理后方可进行授精或保存,在进行精液检查时,可把精液放于保温箱内操作,室温以保持在20一30''C为宜。(1)外观检查:正常的精液颜色为浓厚的乳白色不透明,略有腥味,如精液颜色呈现褐色、红色或绿色,则为异常精液,不能使用。另外,波尔山羊公羊的精液因精子密度很大,仔细观察时,可看到精液呈“云雾状”这是精子运动非常活跃的表现。(2)精液量的测定:波尔山羊公羊每次射精量一般为0.5—2毫升。(3)精子活率的评定:精子活率是一个重要的检查项目,是代表精液品质的重要指标之一。常用的评定方法有两种:第一是评分法。它是用前进运动的精子数占总精子数的百分率来表示精子的活率。具体过程是先用滴管或细玻璃棒蘸取1滴精液放在载玻片上,盖上盖玻片,置于显微镜下,放大300—400倍观察。最后将检查的结果标以0.9、0.8、0.7、0.6等,分别代表90%、80%等的精子是直线前进运动的近似值,这种方法简单易行,生产实践中被广泛采用。第二是死、活精子鉴别染色法。该方法是在经过特殊染色处理的精液抹片上,将死、活精子区别开来,然后算出活精子数占精子数的百分率。此法较客观、准确,但需正确而迅速地制作抹片。染色制作方法:取l滴检查的精液,置于干燥洁净的载玻片上,再取1滴5%的伊红水溶液与精液混合均匀,紧接着再滴上l滴1%的苯胺黑,随即用盖玻片迅速推成抹片,使之迅速干燥,然后在显微镜下观察。染色时活着的精子不着色,死精子因伊红渗入细胞膜而呈红色,据此可算出活精子的百分率。采用此法,要特别注意抹片的温度应保持在35~38℃,制片要快,避免精子在制片过程中受到其他因素的影响。(4)精子密度的测定:精子密度是代表精液品质的另一个重要指标,测定的简单方法是,取l滴新鲜精液在显微镜下进行观察,将精子密度分为密、中、稀三级。密的标准是,在所观察的视野中分布稠密,精子之间没有什么空隙;中的标准是,在所观察的视野中精子之间有一定的空隙,其距离大约等于1个精子的长度;稀的标准是,精子之间距离很大,视野中精子很少。这种方法在生产中被广泛采用,但带有主观性。另一种较精确的方法是,血球计数板计算精子数,由于各种家畜精子密度差异很大,所以密、中、稀三级的具体标准也不同。(5)异态精子的检查:计算双尾、卷尾、双头、巨头等异态精子所占的百分率。一般品质优良的精液,精子畸形率不得超过14%。品质普通的精液,精子畸形率也不能超过20%。如超过20%,可视为异常精液,应弃之不用。
    (四)精液的处理技术
    1、精液的稀释。(1)稀释液的成分。用于精液冷冻的稀释液种类繁多,但基础成分大同小异。A液:乳糖5.0克,葡萄糖3.0克,柠檬酸钠1.5克,Tris0.024克,甘油6.0毫升,溶解后加双蒸水至100毫升。B液:使用前取A液80毫升,加新鲜卵黄20毫升,再加青霉素、链霉素各5万单位。(2) -般稀释法:稀释液须在采精前加温到接近采出的精液温度,精液经检查性状正常。活力达0.7级以上者方可用于冷冻保存,稀释数根据精子密度决定,精子密度为每毫升25亿~30亿时,一般可按1:4~5稀释,稀释时用注射器吸取适量稀释液沿集精瓶壁缓慢注入(防止起泡)并混匀。(3)高倍稀释法:目前这一方法的研究取得了引人注目的成果。精液稀释倍数高达40—50倍,其保存时间长达24小时以上,活率0.7左右,受胎率达到90%以上,该技术主要包括以下几方面:精液稀释液配方:配方1:葡萄糖5克,柠檬酸钠0.3克,乙二胺四乙酸0.1克,加蒸馏水至100毫升,每毫升加青霉素1 000国际单位,稀释液pH值6.8。配方2:葡萄糖3克,柠檬酸钠1.4克,乙二胺四醋酸(EDTA)O.1克,加蒸馏水至100毫升,青霉素10万国际单位,链霉素0.1克,pH值6.8。配方3:葡萄糖3克,柠檬酸钠1.3克,乙二胺四乙酸钠0.1克,加蒸馏水至100毫升,另外在稀释液中加卵黄5毫升和青霉素10万国际单位,pH值6.8。
    精液稀释比例:以1个剂量内含有直线前进运动精子数在1 000万个以上为标准,一般稀释比例为1:20~50。
    2、精液的保存
    精液保存的理论基础是抑制精子的活动,从而降低其代谢强度,以便达到延长精子存活时间的目的。保存精液的方式有3种:(1)常温保存指精液稀释后保存在一般温度下,如室温、冷水中、保温瓶中或地窖中,温度以不超过20℃为宜。在这种温度下,精子运动明显减弱或消失,代谢强度降低,故对延长精子存活的时间有一定作用,可以保存5—6小时。在此温度下保存的精液,由于微生物容易繁殖一;必须加入一定量的抗菌物质。(2)低温保存:它是在精液不结冰的情况下大幅度地降温。一般是将精液稀释后放入冰箱内或装有冰块的保温瓶中。温度维持在O~5℃。在这种温度下,精子运动完全消失,代谢强度显著降低,故保存时间略长。山羊精液利用此法可保存2—3天。(3)超低温保存:它是将精液的温度远远地降到冰点以下,使之冻结起来,故又叫冷冻保存,温度为-196℃。在此温度下,精子代谢完全停止,故保存时间大为延长,经数月乃至数年仍可用于授精。
    (五)输精技术
    输精就是利用器械将精液注入到发情母羊生殖道内,也叫授精,是人工授精的最后一个环节,正确的输精技术和适宜的输精时间是保证较高受胎率的重要条件。
1、输精的时间;约有70%的母羊在夜间发情,当母羊开始有发情表现后初配羊控制在20小时以后第1次输精,经产羊8~12小时输精,也就是早上发情下午输精,第2天早上再输精1次,下午发情第2天早上输精,下午再输精1次。
2、输精操作:用试情公羊进行发情鉴定,再配合阴道检查,若接受试情公羊爬跨,且阴道内黏液呈豆花样者可输精。采用2次输精,间隔6—8小时。输精时将发情母羊外阴用0.2%新浩尔灭擦洗并消毒,将羊后肢提起,呈倒立式,输精员将用生理盐水湿润过的内窥镜(或开膣器)轻轻转动插入阴道,左手拇指打开电源开关,通过调节温度和角度寻找子宫颈口,右手将输精器插入子宫颈口内1.5厘米处注入精液。配后猛击羊尾部,使其子宫收缩,吸引精子到达受精部位。

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