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波尔山羊精液保存影响因素的探讨

发布时间:2013-05-23 09:23 新闻来源:未知 作者:admin
  为了推行波尔山羊的统一供精,延长波尔山羊人工授精过程中精液的保存时间,我们在波尔波尔山羊改良过程中,在丰县梁寨镇合作种羊场进行了波尔山羊精液的高倍稀释、常温保存、冷冻技术及授精效果的系列研究,对波尔山羊精液保存若干影响因素进行了探讨,现将结果报告如下。
  1、精液的处理
  波尔山羊精液采集后,往往由于处理不当而缩短精子的保存时间。为此,我们选用5只公波尔山羊连续采精55天,采用4种不同处理方法,借以寻求延长精子保存时间的有效途径。
  1.1不同稀释倍数对精子存活的影响 取活力0.83,密度每毫升20.6亿,PH值6.6的精液进行1∶2、1∶10、1∶20倍稀释(稀释液为:乳糖3克、葡萄糖2克、柠檬酸三钠1克,蒸馏水100毫升,青、链霉素各10万单位),置于14—16℃的井水中保存,间隔8小时检查活力,经6次重复,结果0.3级保存时数分别为51、46、37.5小时,精子存活指数分别为45.3、35.2、17.6,以1∶2保存效果最好。
  1.2不同保存温度对精子存活的影响 取活力0.8,密度每毫升21.3亿,稀释后进行常温(14—16℃)、低温(2—5℃)、超低温(―196℃)保存,间隔8小时检查活力,经4次重复,结果14—16℃的0.3级保存时数为48小时,精子存活指数为32.3。2—5℃的0.3级保存时数为64小时,精子存活指数为55.2,说明2—5℃的保存效果较好(P<0.01)。将精液按1∶3—5的比例稀释(稀释液为乳糖4.6克,葡萄糖3.1克,柠檬酸钠1.5克,蒸馏水100毫升,卵黄20毫升,甘油5毫升,青、链霉素各10万单位)在液氮中进行冷冻,解冻活率为49.7%(42.8%—54.6%)。
  1.3不同浓度解冻液对解冻后精液存活指数的影响 在30℃的温度条件下保存解冻后活力0.5级以上的精液,结果含有1.8%、2.2%、2.9%柠檬酸钠解冻液的存活指数分别为2.8、3.6、3.2,以含有2.2%柠檬酸钠解冻液的存活指数最高。
  1.4不同含气量对精子存活的影响 用青霉素瓶20只,盛装稀释后的精液,其中10只装满作不含气保存,另10只仅装半瓶作含气保存,在14—16℃的条件下,每8小时取出一瓶检查活力,经5次重复,精子存指数分别为42.3和39.8,两者比较差异不显著(P>0.05)。 
  2、稀释液的筛选
  2.1不同配方对精子存活的影响 A配方为:葡萄糖5克、柠檬酸钠0.3克、乙二安四乙酸二钠0.1克。B配方为:乳糖5克、葡萄糖3克、柠檬酸钠1.5克。以上两配方均用蒸馏水100毫升溶解,过滤、清毒后分别加入青、链霉素各10万单位。利用A、B配方按10倍稀释波尔山羊精液在14—16℃的条件下进行保存试验。结果0.3级保存时数A配方为27小时,B 配方为57小时。精子存活指数A 配方为19.6,B配方为36.3,以B 配方效果最佳(P<0.01)。取A 配方液80毫升,B 配方液100毫升分别加入卵黄20毫升,甘油5毫升进行冷冻效果试验,结果A配方的解冻活率为29.73%,B 配方的解冻活率为49.7%,精子复苏率61.97%,两配方比较,差异极显著(P<0.01),说明不同稀释液配方对精液的保存影响极大,对常温保存(14—16℃)和超低温保存(―196℃)的影响是一致的。
  2.2不同PH值对精子存活的影响 将B配方稀释液的PH 值分别调整为6.2、6.4、6.6、6.8、7.2五个梯度,用混合精液为1∶10的比例稀释,在14—16℃的进行保存试验,间隔8小时检查活力,重复4次,结果0.3级的保存时数分别为47、56、57、43、21,表明稀释液PH值以6.4—6.6效果最佳。
  2.3不同渗透压对精子存活的影响 羊的精液渗透压为△0.641℃(0.55—0.70),我们利用乳糖葡萄糖、柠檬酸钠三种药物分别设计了冰点下降度为△0.350℃、△0.553℃、△0.609℃、△0.857℃、△0.950℃五个配方,将精液按1∶5的比例稀释,在14—16℃的条件下每8小时检查一次活力。经5次重复,平均0.3级保存时数分别为21、46、43、51、30小时,以△0.553℃—0.857℃保存效果最好,极显著地高于0.350℃和0.950℃(P<0.01)两个冰点。 
  3、受精力试验
  3.1不同稀释倍数的受胎效果 将自然发情的母羊按输入精液的稀释倍数6个组,即1∶5、1∶10、1∶20、1:30、1∶40、1∶50,结果第一情期受胎率分别为80%(36/45)、80%(36/45)、76.02%(187/246)、71.6%(58/81)、77.78%(35/45)、80%(68/85),独立性检验,试验组各组差异不显著(P>0.05)。
  3.2不同稀释液常温保存的受胎效果 将用A、B配方稀释液分别保存12—14小时, 23—25小时的精液进行输精试验,结果保存12—14小时的精液受胎率高于23—25小时,A 配方与B配方受胎率差异不显著(P>0.05)。保存23—25小时时,B配方的受胎率极显著地高于A 配方(P<0.01),结果见表。
不同稀释液配种受胎及产羔效果
单位:小时、只、% 稀释液代号 精液存放时间 配种只数 受胎只数 受胎率 平均产羔数 
稀释液代号 精液存放时间 配种只数 受胎只数 受胎率 平均产羔数
A配方 12—14 46 34 73.91 1.81
23—25 30 14 46.67 1.79
B 配方 12—14 50 42 84.00 1.97
23—25 51 40 78.43 1.83

  3.3不同稀释冷冻颗粒的受胎效果 分别用A配方和B配方(另加卵黄20毫升、甘油5毫升)制作冷冻颗粒,经45—60℃水浴快速解冻。每羊输入1颗粒,结果A配方的受胎率为47.27%(26/55),B配方的受胎率为71.45%(786/1100),两配方受胎率比较差异极显著(P<0.01)。 
  3.4不同保存温度的受胎效果 用B配方将精液按1∶10比例稀释,分别放在2—5℃和14—16℃的温度条件下保存,分别取保存16—19小时和35—37小时的精液进行输精试验,结果低温保存16—19小时的受胎率为81.82%(54/66),35—37小时为73.33%(44/60)。常温保存16—19小时受胎率为84.21%(32/38),35—37小时为65.96%(31/47),统计分析,各组间差异不显著(P>0.05)。 
  4、讨论与分析
  4.1 精液保存时,稀释倍数以1∶2—10为宜,稀释倍数过高随着保存时间的延长,往往会造成精液的沉淀,缩短精液的保存时间。采用高倍稀释输精时,可采取二次稀释法。
  4.2 在低温保存波尔山羊精液时,应采取等温稀释,逐渐降温的方法,防止突然降温造成精子冷休克。必要时可在稀释液中加入10—20%的新鲜卵黄作为抗冻剂,可使低温条件下精液的保存时间延长。
  4.3 在波尔山羊精液保存过程中,PH值往往会发生一定的波动,使保存效果发生变化,应注意PH值的测定,并及时进行调整。
  4.4 进行波尔山羊精液高倍稀释输精时,我们将输精剂量由常规的0.1—0.2毫升提高到0.4毫升,子宫颈口输精改为阴道输精,同样保证了较高的受胎率。 

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